《表1 鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因引物序列与长度》

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《我院呼吸科鲍曼不动杆菌耐药及流行病学特征分析》

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取100μL鲍曼不动杆菌过夜培养物加至10 m L LB，37℃、180 r/min条件下振荡培养18 h。细菌DNA提取按照DNA抽提试剂盒说明书进行。采用Primer Premier 6.0软件设计碳青霉烯酶基因引物，引物序列见表1。PCR反应体系（20μL）:2×Es Taq Master Mix10μL，上下游引物各0.3μL，DNA 0.4μL，dd H2O9μL。扩增条件:94℃5 min，94℃30 s；52~56℃30 s；72℃30 s；共35个循环，最后72℃延伸10 min。扩增完毕，PCR反应产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，选取阳性产物进行纯化和测序。测序结果在NCBI上进行BLAST比对。