《表1 碳青霉烯酶基因引物》

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《北京与银川两家医院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的流行特征研究》

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聚合酶链反应（Polymerase chain reaction，P C R）：煮沸法提取D N A模板，菌液1 0 0℃煮沸10min，10000r/min离心5min；反应体系扩增条件为95℃预变性5min，95℃变性30s，退火30s，退火温度分别为56℃、55℃、50℃、52℃、54℃，72℃延伸1min，30个循环，最后72℃延伸10min，PCR产物用1.0%琼脂糖凝胶电泳，核酸染色剂使用Gold View1型，结果在紫外灯下观察，将目的片段大小一致的阳性标本PCR产物送北京华大基因股份有限公司进一步测序验证，所测序列与Gen Bank中BLAST程序中的序列比对。引物见表1，blaKPC、blaNDM、blaIMP、blaOXA-48引物是根据Pub Med数据库中的目的基因序列，由Primer5设计；blaVIM是引用文献[11]中序列，引物序列由北京华大基因股份有限公司合成。Taq DNA聚合酶与DNA marker、10×loading buffer、DL2000 Marker、Gold View1核酸染色剂购自大连Ta Ka Ra公司、50×TAE购自Solar Bio公司。