《表1 3种碳青霉烯酶基因引物》

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《肺炎克雷伯菌临床分布及其碳青霉烯酶基因型检测分析》

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参照文献[9]基因序列设计blaKPC、blaNDM、blaIMP基因引物，由上海生工生物工程有限公司合成，具体见表1。参考Omega小抽试剂盒提取DNA作为PCR反应模板，具体步骤参照说明书及相关文献[10]，PCR反应体系为25μl（2×PCR Mix 12.5μl，上下引物各1μl，DNA模板1μl，ddH2O加至25μl），PCR反应条件为94℃预变性10 min，94℃变性45 s，52℃退火45 s，72℃延伸60 s，35个循环，72℃延伸7 min。PCR完成后吸取5μl至1.5%琼脂糖凝胶进行电泳（恒压100 V），电泳60 min后，在凝胶成像仪下观察不同的泳道blaKPC (798 bp）、blaNDM (621 bp）、blaIMP (232 bp）是否存在特异性条带。将PCR阳性产物送至上海生工生物工程有限公司进行双向测序，测序后序列采用DNA Star软件校正，登陆NCBI官网（https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）进行序列对比分析。