《表1 PCR扩增碳青霉烯酶基因的引物》

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《rCIM检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的应用价值研究》

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注：Y=C或T

按细菌组DNA抽提试剂盒说明书提取细菌D N A，筛查以下常见碳青霉烯酶基因：b l aK P C、blaNDM、blaIMP、blaOXA-48和blaVIM，引物序列见表1。PCR总反应体积为25μL，Mix 12.5μL，DNA模板2μL（50ng/μL），引物各1μL（10μmol/L），去离子水8.5μL。PCR反应条件为：预变性，94℃×5min；循环，94℃×45s，55℃×45s，72℃×1min，共36个循环；延伸，72℃×10min。PCR产物用2%琼脂糖凝胶电泳，电压100V，时间1h，在凝胶成像仪上阅读结果。PCR扩增阳性结果测序后，用NCBI网站中的Blast程序进行比对。