《表1 碳青霉烯酶耐药基因引物序列及产物长度》

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《苍南县75株医院感染耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌耐药基因分析》

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细菌DNA提取采用煮沸法。PCR扩增筛选主要的D类酶基因（bla OXA-23、bla OXA-51、bla OXA-48、bla OXA-24和bla OXA-58）、B类酶基因（bla SIM、bla IMP和bla VIM）和A类酶基因（bla KPC），参照文献[7]设计引物序列。见表1。PCR反应体系共25μL：包括10×PCR缓冲液2.5μL，2 mmol/L dNTP 2μL，500μmol/L上游引物和下游引物各1μL，1.25U r Taq酶0.125μL，DNA模板2μL，加无菌去离子水定容至25μL。PCR反应条件：94℃预变性5 min；94℃变性30 s，52～56℃退火复性45 s，72℃延伸1 min，做30个循环；72℃延伸7 min。PCR扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳，溴化乙啶（EB）染色后于凝胶成像系统观察结果，阳性扩增产物进行测序，测序结果与Gen Bank数据库BLAST系统（http://www.ncbi.nih.gov/blast）已知的碳青霉烯酶基因序列比对，确定基因型。