《表1 碳青霉烯酶基因PCR扩增引物序列》

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《云南地区肿瘤患者CRE菌株的表型筛选与耐药基因相关性研究》

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煮沸法提取细菌DNA模板，PCR扩增碳青霉烯酶类耐药基因，包括blaKPC-2、blaSME、blaNDM-1、blaIMP、blaVIM、blaOXA-48共6种[4]，见表1。PCR扩增体系为25μL:2×Tap PCR Master Mix 12.5μL，DNA模板1μL，上、下游引物（10μmol/L）各1μL，ddH2O 9.5μL。反应条件为：95℃预变性5min（blaKPC-2为94℃3min，blaIMP和blaVIM为94℃5min）；94℃变性45s（blaNDM-1为94℃30s），55℃退火45s（blaKPC-2为56℃45s，blaNDM-1为63℃30s，blaIMP为53℃45s），72℃延伸1 min（blaNDM-1为72℃45s），30个循坏；72℃终延伸10min(blaNDM-1为72℃3min）。扩增产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳后，紫外凝胶成像仪观察结果。