《表1 常见碳青霉烯酶基因的相关PCR引物序列》

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《大肠埃希菌质粒介导的bla_(NDM-1)基因耐药及传播性研究》

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采用煮沸法提取试验菌株DNA，应用NDM-1引物进行blaNDM-1基因扩增，blaNDM-1阳性菌株再进行碳青霉烯酶耐药基因（blaKPC-2、blaSPM、blaGIM、blaVIM、blaIMP、blaOXA-48）筛查。PCR引物序列见表1。PCR扩增体系为:上游引物2μL，下游引物2μL，模板2μL，ddH2O 19μL；2×Taq PCR Master Mix25μL。反应条件:95℃预变性5 min，95℃变性30 s，60℃退火30 s，72℃延伸1 min，共29个循环，72℃延伸10 min。最后将扩增产物用1.5%的琼脂糖凝胶进行电泳检验，将试验出现的阳性条带PCR扩增产物送苏州泓讯生物科技有限公司进行测序，测序结果采用美国生物信息中心（National Center for Biotechnology Information，NCBI）中的BLAST（http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）进行分析后判断检测结果是否准确。