《表1 启动子克隆及qRT-PCR引物序列》

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《杜仲糖基转移酶基因的启动子克隆及表达分析》

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参照魏胜华和孟娜（2011）的CTAB法对杜仲DNA进行提取。以实验室前期通过快速扩增cD-NA末端（rapid amplification of cDNA ends，RACE）克隆获得EuCGT1（GenBank No.KJ413006.1）序列及杜仲基因组数据库为基础，使用Primer Premier5.0设计引物对EuCGT1上游序列进行扩增，引物信息见表1。为便于克隆及载体构建，在引物中添加了SalⅠ和Eco RⅠ两个限制性酶切位点。扩增体系为50μL，包括10×High Fidelity PCR Buffer 5μL、50 mmol/L MgSO42μL、25 mmol/L dNTP MIX4μL、EuCGT1上游序列正反向引物（10μmol/L）各1μL、DNA 3μL、Platinum 0.2μL、ddH2O 33.8μL；扩增条件为：94℃预变性2 min、94℃变性15 s、67℃退火30 s、68℃延伸2 min 35个循环；72℃延伸5 min。