《表1 Ppc ERF5基因及启动子克隆引物》

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《中国樱桃乙烯响应因子PpcERF5基因克隆与功能分析》

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设计启动子克隆引物Promoter of Ppc ERF5 p1和Promoter of Ppc ERF5 p2 （表1），以樱桃基因组DNA为模板，扩增获得全长序列并连接到T载体中用于序列测定，选取多次扩增一致的序列用T4连接酶与p Green载体连接，获得p Green II 0800-LUC::Ppc ERF5启动子重组载体，利用引物Promoter of Ppc ERF5 p1和Promoter of Ppc ERF5 p2进行单菌落PCR检测，检测为阳性后，将载体转入GV3101农杆菌中，以含有启动子的工程菌液注射烟草（Nicotiana tabacum L.），共培养3 d后在其叶片表面喷0.2 g·L-1荧光素酶，借助活体成像仪（Tanon-6600，上海天能科技有限公司），以活体发光成像法进行定性分析。再分别将共培养3 d的烟草进行4°C培养2 d和喷施100μmol·L-1 ABA，采用Dual-Luciferase?Reporter Assay System （Promega，USA）试剂盒进行定量分析。