《表2 Ppc ERF5基因启动子区顺式作用元件预测结果》

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《中国樱桃乙烯响应因子PpcERF5基因克隆与功能分析》

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利用PCR扩增获得了Ppc ERF5基因起始密码子上游2 071 bp序列，分析发现序列中包含CAAT-box、TATA-box等启动子关键元件。在Plant Care数据库中比对发现，序列中含有低温响应元件LTR（low-temperature responsive element，CCGAAA）、干旱诱导元件MBS （MYB binding site，CAACTG）以及脱落酸响应元件ABRE （ABA responsive element，ACGTG）（表2）。将Ppc ERF5基因启动子载体注射到烟草叶片表皮细胞中，共培养3 d，在烟草叶片表面喷施荧光素酶后，可见明显荧光，说明该启动子可以在烟草叶片中表达，具有启动子活性（图5-A）。进一步测定LUC/REN比值发现，常温共培养3 d后，Ppc ERF5基因启动子表达效率是p Green II 0800空载体表达效率的1.72倍，ABA诱导可将表达效率提高至5.98倍，低温处理2 d可将启动子表达效率提高至14.84倍，进一步说明该启动子受到低温和ABA诱导表达（图5-B）。