《表1 牦牛EPO、HIF-1α、HIF-3α和HIF-1AN基因启动子克隆引物》

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《牦牛低氧适应相关基因启动子甲基化程度与组织差异表达关系研究》

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根据普通牛EPO基因（NM＿173909）、HIF-1α基因（NM＿174339）、HIF-3α基因（NM＿001105342）以及HIF-1AN基因（NM＿001083443）的启动子序列设计扩增相应基因启动子的引物（表1）。以亚硫酸盐修饰后的DNA为模板进行扩增，25μL PCR体系：模板2μL（80 ng）、10×buffer 2.5μL、EX-Taq(Ta Ka Ra）0.2μL(1 U），上下游引物各1μL(10 pmol/L）。扩增条件为：94℃预变性3 min，94℃变性30 s、退火30 s、72℃延伸2 min进行35个循环后72℃继续延伸7 min、4℃保存。PCR产物用1%琼脂糖凝胶电泳进行检测，回收相应目的DNA片段。