《表2 实验中所用的引物：青海湖裸鲤AP-1基因的克隆与表达分析》

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《青海湖裸鲤AP-1基因的克隆与表达分析》

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将提取的裸鲤的各个组织经匀浆后按照RNAprep Pure Tissue Kit （Tiangen，China）操作说明书提取RNA，然后取其中的2μL用核酸蛋白检测仪检测其浓度与OD值。再取5μL所提取的RNA在1%的琼脂糖凝胶中电泳，检测其完整性。按照Prime ScriptTMⅡ1stStrand c DNA Synthesis Kit （Ta Ka Ra，Japan）试剂盒操作说明，将上述提取组织的总RNA反转成c DNA，置于-20℃冰箱备用。在NCBI网站上进行BLAST比对找到与青海湖裸鲤同源物种的AP-1基因序列，并用DNAMAN软件进行序列比对，在保守区设计中间片段引物AP-1-F和AP-1-R （表2）。PCR反应体系为（25μL）:Ex Taq 12.5μL，F 1μL，R1μL，c DNA 1μL，d H2O 9.5μL；反应程序为：94℃5 min；94℃30 s；55℃30 s；72℃90 s；72℃10 min，进行30个循环。将琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，对目的条带切胶并利用试剂盒进行胶回收。再将回收产物进行连接，连接至p MD19-T载体，连接体系为：DNA 4.5μL，T-Vector 0.5μL，SolutionⅠ5μL。最后进行转化，转化至大肠杆菌感受态细胞DH5α，涂布于加入Amp （100 mg/L）的LB固体培养基中，待长菌后挑取阳性菌落进行PCR检测，并将其送至上海生工生物工程有限公司进行测序。