《表1 引物序列及用途:夏枯草PvDXS基因的克隆和表达分析》

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《夏枯草PvDXS基因的克隆和表达分析》


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从转录组数据库中得到的夏枯草DXS基因序列两端非编码区设计一对特异性引物(DXR-F,DXR-R)(表1),以夏枯草叶片cDNA为模板,进行扩增:cDNA 2.0μL,2×Es Taq mix 10.0μL,10.0μmol·L-1正反向引物各1.0μL,加dd H2O 6.0μL至体积为20.0μL。反应程序:95℃预变性1 min;95℃变性30 s,60℃退火30 s,72℃延伸1.5 min,35个循环;72℃延伸5 min。1%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物,将扩增的目的条带切胶回收纯化,并连接到pMD19-T载体上,蓝白斑筛选,菌落经PCR检测后的阳性克隆送往三博远志生物技术有限公司测序进行测序。组成型表达的actin基因(KJ010818)作为内参。