《表1 引物序列及用途：日本结缕草ZjSPL4基因的克隆、亚细胞定位及表达分析》

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《日本结缕草ZjSPL4基因的克隆、亚细胞定位及表达分析》

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采用Trizol试剂提取结缕草叶片总RNA，利用反转录试剂盒制备c DNA，Primer Premier 5.0软件设计特异性引物SPL4-F/SPL4-R（表1）扩增获得日本结缕草SPL4基因。采用降落PCR扩增基因，反应程序为95℃10 min；95℃30 s，60℃~58℃30 s，72℃1 min，30个循环；72℃5 min，4℃保温。采用1.0%琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物并进行纯化，将纯化产物连接于T载转化大肠杆菌感受态，挑取阳性菌落并通过PCR挑选阳性转化子送睿博公司进行测序。获得测序结果采用DNAMAN 7.0软件、NCBI Blast分析结果，预测该基因开放阅读框，并设计引物ORF-F、ORF-R扩增该基因ORF，反应程序为95℃10 min；95℃30 s，58℃30 s，72℃1 min，30个循环；72℃5 min，4℃保温。