《表1 引物序列：猪PKM2基因的序列分析与组织表达及亚细胞定位》

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《猪PKM2基因的序列分析与组织表达及亚细胞定位》

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下划线部分为引入的酶切位点；下划线前面字母为保护碱基。

根据NCBI上GeneBank的猪PKM2序列（登录号为XM＿001929069.5），分别设计编码区上下游引物PKM2–CDS–F和PKM2–CDS–R（表1）。PCR扩增体系:2μL上游引物（10μmol/L），2μL下游引物（10μmol/L），5μL cDNA，25μL PrimerSTAR Max Premix，16μL ddH2O，总体积50μL。PCR反应条件为:95℃预变性2 min；98℃变性10 s，60℃退火15 s，72℃复性15 s，循环30次；4℃保存。利用琼脂糖凝胶回收PCR扩增产物，然后与pMD19–T载体连接，转化大肠埃希菌DH5a。随机挑取5个克隆，经菌液PCR鉴定为阳性后送去测序。基因测序与引物合成由南京金斯瑞生物科技有限公司完成。采用定量PCR检测PKM2基因在各个组织的表达情况。以HPRT为内参，利用PKM2–qPCR引物（表1）进行定量PCR反应，反应体系及条件参照SYBR Premix EX Taq定量PCR试剂盒说明书。