《表1 基因克隆、qPCR及亚细胞定位引物序列》

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《龙眼胚性愈伤组织DlCK2-α基因克隆、亚细胞定位及其表达特性分析》

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在龙眼胚性愈伤组织转录组数据库（SRA050205）中筛选出DlCK2-α基因的序列进行分析，在NCBI数据库中Blast进行同源比对并下载与之同源性较高的物种cDNA序列，在同源区段设计引物，以cDNA为模板进行保守区序列PCR扩增。将得到的目的片段胶回收、TA克隆并筛选阳性克隆子，菌液PCR验证，将有目的条带的菌液送至博尚生物技术有限公司测序。根据测得的保守区序列设计两个上游引物，分别以UPMLONG和UPMLSHORT为通用引物进行两轮扩增，用RACE法扩增DlCK2-α基因的3’端序列。其中第一轮以cDNA为模板，第二轮以稀释100倍的第一轮产物为模板。将RACE所得序列与保守序列进行拼接，用DNAman分析拼接全长的开放阅读框，并设计上下游引物用以验证DlCK2-α基因的完整ORF（表1）。PCR反应体系（25μL):cDNA1μL、上下游引物各1μL、ddH2O 9.5μL、Mix12.5μL。