《表1 沙葱萤叶甲Hsp10基因克隆与qPCR检测引物信息》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《沙葱萤叶甲热激蛋白基因GdHsp10a的克隆、分子特征与表达分析》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

以本实验室组装的沙葱萤叶甲转录组数据库中基因序列信息为基础，与NCBI中已上传的其它昆虫Hsp10基因序列的保守区域进行比对，筛选出沙葱萤叶甲Hsp10基因。利用引物设计软件Primer Premier 5.0设计特异性引物（表1），扩增出中间片段。以cDNA第一链为模板进行RT-PCR扩增，采用25μL PCR反应体系:cDNA模板1μL、上下游引物GdHsp10a-F/R各1μL、PCR Master Mix（2×）12.5μL、超纯水9.5μL。反应条件:94℃预变性4 min；94℃变性30 s，56℃退火30 s，72℃延伸1 min，进行30个循环；72℃延伸10 min，4℃保存。将目的片段回收后，利用pMD-19T载体连接，转入大肠杆菌感受态细胞DH5α中，吸取连接转化后的感受态细胞200μL，涂布于含Amp的LB平板上过夜培养12～16 h，而后筛选阳性克隆。在挑取的阳性克隆中加入10μL ddH2O，取2μL作为cDNA模板进行菌液RT-PCR，反应体系及条件同上。验证所测序列的正确性后，送北京六合华大基因科技股份有限公司测序。