《表1 本研究所用引物：沙葱萤叶甲气味结合蛋白GdauOBP20的基因克隆、原核表达及其结合特性》

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《沙葱萤叶甲气味结合蛋白GdauOBP20的基因克隆、原核表达及其结合特性》

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下划线部分为酶切位点

根据笔者实验室测得的转录组数据筛选并分析得到OBP20的中间片段，在序列两端设计引物（表1），以雄成虫触角c DNA为模板进行PCR扩增。反应体系：c DNA模板1μL，正反向引物各1μL，Premix TaqTM（V2.0 plus dye）（Ta Ka Ra）12.5μL，dd H2O 9.5μL。反应条件：94℃预变性3 min；94℃变性30 s，50℃退火30 s，72℃延伸1 min，30个循环；72℃延伸10 min。1.5%琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物，用DNA凝胶回收试剂盒回收纯化目的片段，连接pMD19-T克隆载体（Ta Ka Ra），转化到大肠杆菌（Escherichia coli）感受态细胞DH5α（TIANGEN）后涂布含氨苄Ampicillin(Amp）的LB固体培养基，37℃培养12 h，挑取白色单菌落进行PCR验证，然后将验证正确的菌液于LB液体培养基中过夜培养，再将菌液进行送样测序。