《表1 引物信息：山羊EDNRA基因编码区克隆与组织表达规律分析》

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《山羊EDNRA基因编码区克隆与组织表达规律分析》

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根据克隆得到的山羊EDNRA序列，选用β-actin（NM＿001009784）作为内参基因。采用Primer Premier5.0软件设计实时荧光定量引物（表1）。使用Bio-Rad CFX 96荧光定量PCR仪检测目的基因及内参的表达量，每组3个重复。反应体系为10μL:SYBR Premix Ex TaqTMⅡ（TaKaRa，Dalian，China）5μL，上下游引物（10μmol/L）各0.4μL，cDNA模板0.8μL，ddH2O 3.4μL。反应条件.：95℃预变性30 s；95℃5 s，58.5℃30 s，39个循环；以0.5℃/s的速度65℃缓慢递增到95℃，同时对荧光信号的变化进行观察，如果随着温度的升高信号强度随着降低，且形成一个单一的峰，没有任何杂峰，则说明产物的扩增为特异性的。