《表1 引物序列(1)：山核桃贝壳杉烯氧化酶基因CcKO的克隆和表达分析》

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《山核桃贝壳杉烯氧化酶基因CcKO的克隆和表达分析》

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（1）GGATCC、GTCGAC和CCATGG（下划线）分别为Bam HI、Sal I和Nco I的酶切位点。GGATCC，GTCGAC and CCATGG（underlined） are the restriction sites of Bam HI，Sal I and Nco I separately.

将过量表达山核桃Cc KO基因的核桃体胚置于体视荧光显微镜（Carl Zeiss Stereo D13covery V12，Axio Cam MRc system，蓝光488 nm）下进行检测，观察体胚荧光激发情况；对具有绿色荧光GFP激发的核桃体胚进一步开展核桃转化阳性体胚验证，验证方法同扩增PCR体系（引物参照表1）。经鉴定为阳性的Cc KO基因过表达体胚培养至子叶胚阶段，干化处理3～5天后转接于萌发培养基中进行植株再生，培养条件参考张启香等（2011）。Cc KO基因过表达植株萌发后进一步进行再生植株阳性验证，并剪取生长健壮且长度相等的转化植株的茎尖（1 cm）培养20天，观察植株表型并统计数据。