《表2 引物信息:柑橘CCD基因家族鉴定及CcCCD4a对果肉颜色的影响》

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《柑橘CCD基因家族鉴定及CcCCD4a对果肉颜色的影响》


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使用RNAprep pure植物总RNA提取试剂盒(DP432,天根)提取植物总RNA。使用PrimeScriptTM RT Reagent Kit With g DNA Eraser Perfect Real Time(RR047,TaKaKa)试剂盒将RNA反转录成cDNA供荧光定量使用。使用Prime3(https://primer3plus.com)设计引物,引物信息见表2。内参基因为柑橘β-Actin,在CFX96 TouchTM荧光定量PCR仪上对Cc CCD4a在10个柑橘品种中不同时期的表达量进行分析。扩增体系含2μL cDNA,上、下游引物各0.5μL(10μmol·L-1),SYBR 6.25μL,ddH2O 3.25μL,总体系12.5μL。反应程序为:95℃预变性30 s;95℃变性5 s,60℃退火30 s,95℃延伸15 s,40个循环,每个处理3次重复。以2ΔΔCt法计算Cc CCD4a相对表达量。