《表1 用于基因表达分析的特异引物序列信息》

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《硝酸盐诱导的大麦HvLBD5/14基因表达分析及功能验证》

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实时荧光定量PCR采用Bio-Rad C1000 cycler real time PCR system进行分析，反应体系10μL，包含1μL反转录反应液、0.2μmol/L引物和5μL SYBR Premix Ex Taq（DRR041D）。实时荧光定量引物序列见表1，以大麦Actin基因（Hv Actin，HORVU1Hr1G002840）作为对照。PCR程序如下:94℃预变性5 min；然后35个循环的反应，为94℃变性10 s，60℃退火20 s，72℃延伸30 s；最后72℃延伸7 min；65～98℃绘制溶解曲线。采用比较阈值法对实时定量结果进行分析，手工设置荧光域值，确定在该荧光域值下特定的循环数Ct值，根据Ct值，确定相对表达量C值，C=2-ΔCT，ΔCt=Ct（目标基因）-Ct（内标基因）。采用双尾等方差t检验的方法进行显著性检验（P<0.05）。试验设置3次生物学重复。