《表2 用于基因定量的引物序列信息》

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《过瘤胃葡萄糖对围产期奶牛空肠微生物群落和黏膜代谢及免疫相关基因表达的影响》

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荧光定量PCR在Lightcycler 480Ⅱ序列检测系统（Roche公司，瑞士）中进行，按照TaKaRa定量试剂盒说明书推荐的体系和条件进行反应。反应体系为:SYBR GreenⅠ荧光染料预混试剂5μL，ROX 0.2μL，上、下游引物（10μmol/L）各0.2μL，cDNA模板1μL，灭菌双蒸去离子水3.4μL。反应程序为:95℃预变性30 s；95℃变性5 s，60℃退火和延伸30 s并采集荧光信号，共40个循环；按仪器操作说明选择熔解曲线分析，60℃升至95℃15 s，60℃15 s、95℃15 s，自动采集荧光。同时，每对引物均设置相应的无模板阴性对照（NTC）和无聚合酶污染对照（NAC）。以β-肌动蛋白（β-actin）和3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAP-DH）为参比基因，按照2-ΔΔCt法计算目的基因的表达量，结果以差异变化（FC）表示[25]。用于黏膜基因表达的引物序列信息见表2。