《表2 用于定性和定量ARGs等目的基因片段的引物基本信息》

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《江苏省代表性水源地抗生素及抗性基因赋存现状》

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对各介质中两种磺胺类ARGs（sul1和sul2）、3种四环素类ARGs（tet W、tet C和tet Q）、两种氯霉素类ARGs（cml A和floR）以及与ARGs传播密切相关的一类整合子intl1进行定量PCR（q PCR）分析．扩增ARGs片段所对应的引物名称、序列、片段大小和退火温度的信息见表2．目的基因的PCR扩增体系设置为30μL，其中包括15μL的q PCR Mix，Mg2+（2 mmol·L-1）溶液2μL，正向和反向引物各0.5μL，模板2μL，模板DNA浓度约为10 ng·μL-1，加dd H2O补足至30μL.PCR扩增设置程序为:在95℃预变性3 min，95℃变性30 s，退火温度为60℃，最后72℃延伸30 s，循环30次．PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳跑胶后，割取扩增片段大小正确的条带回收，用于后续的标准品制作．将纯化后的PCR产物连接到p MD19-T载体上，连接载体转化后涂布至LB琼脂平板，在37℃下过夜培养，PCR鉴定5个单克隆菌落，挑选接种一个阳性菌落进行扩大培养，之后进行质粒抽提，即标准品质粒．采用标准品专用稀释液做10倍梯度稀释，制备目的基因的定量标准曲线．