《表2 Real time-PCR所需的内参引物和特异性目的基因荧光定量引物》

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《滇重楼3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶PpHMGR基因的克隆及分析》

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根据目的基因序列，利用Primer 6.0设计实时荧光定量引物HMGR-QF、HMGR-QR，以β-actin（肌动蛋白）为内参基因（表2），c DNA模板统一稀释为50 ng/μL，实验在ABI公司7500荧光量PCR仪上进行，对不同组织部位的目的基因表达情况进行分析。反应体系（20μL）及程序参照TIANGEN SuperReal PreMix Plus（SYBR Green）说明书，分别设定3次重复，取其平均值。反应体系：2×Super Real PreMix Pius 10μL；正向引物（10μmol/L）0.6μL；反向引物（10μmol/L）0.6μL；cDNA模板1μL；50×ROX Reference Dye 0.6μL；加RNase-free ddH2O 7.2μL，补足到20μL。采用两步法PCR扩增反应，预变性95℃，15 min，95℃变性10 s；60℃退火/延伸20 s；40个循环。同时在60℃～95℃进行融解曲线分析，利用2-ΔΔCT法计算基因的相对表达量。