《表2 内参和目的基因表达的引物序列》

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《茉莉酸甲酯结合低温预贮对尖椒采后品质及生理特性的影响》

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采用实时荧光定量PCR法分析抗氧化酶基因表达，采用TRIzol试剂提取总RNA，操作方法为：取0.1 g尖椒组织加入1 mL TRIzol混匀后，于4℃12 000×g离心10 min，按说明书要求分别加入0.2 mL氯仿、0.5 mL异丙醇、1 mL体积分数75%乙醇溶液，提取尖椒总RNA。取样本RNA进行反转录，合成第一链cDNA。根据美国国立生物技术信息中心公布的青椒基因序列，利用Primer Premier 5.0软件设计引物，以UBI-3作为内参基因，POD、CAT、APX为目的基因，由上海生物工程有限公司完成引物的合成，引物的设计序列如表2所示。合成的cDNA与目的基因在96孔板点样，进行定量PCR，并于LightCycler 480II实时荧光定量PCR仪进行PCR扩增，每个样品做3个重复，反应程序：94℃预变性30 s；94℃5 s、60℃34 s，40次循环。将实时荧光定量PCR数据用2-ΔΔCt法分析，利用LightCycler 480II实时荧光定量PCR系统软件进行相对定量的数据分析[25]。