《表1 各目的基因及内参引物序列》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《Let-7a过表达对结肠黏液腺癌细胞LS-174T增殖及侵袭性的影响》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

将上述5组细胞接种于96孔板，每组设8个复孔，同时设调零孔。分别于12、24、48、72、96 h各时点取一板，向所对应孔中各加入20μL配好的MTT溶液。培养箱内孵育4 h后弃去培养液，每孔加入DMSO 200μL，避光摇床上振荡10 min，使其充分混匀。酶标仪上选择570 nm波长，检测各孔的OD值，以时间为横坐标，OD值为纵坐标，绘制LS-174T细胞生长曲线，并做相关统计学检测。1.2.3 RT-q PCR检测let-7a及TGF-β1 mRNA表达水平:将各组贴壁细胞消化离心后，裂解，提取RNA并反转录为c DNA，将反转录所得的c DNA，采用SYBR Green嵌合荧光定量PCR法（按照日本Toyobo公司的RT-qPCR试剂盒说明书操作），以β-actin为内参检测细胞的TGF-β1含量，以U6为内参检测细胞let-7a的含量，引物序列见表1。mRNA相对定量的计算方法:首先用RT-q PCR得到的目的基因Ct值分别与其相对应的内参的Ct值相减进行校正，得到目的基因的校正Ct值（ΔCt），再以空白对照组中的平均校正Ct值作为本底参数，则目的基因的量:2-ΔΔCt=2-（ΔCt目的基因-ΔCt本底参数）。每个实验重复3次取平均值。