《表3 用于FBP2基因混池测序的15对PCR扩增引物序列信息》

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《中国荷斯坦牛FBP2基因对产奶性状的遗传效应分析》

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FBP2:果糖二磷酸酶2；下同

根据GenBank中牛FBP2基因的基因组序列（GenBank No.AC＿000165.1），利用Primer Primer3.0（http://bioinfo.ut.ee/primer3-0.4.0/）和Oligo6.0软件设计了15对引物（表3），覆盖FBP2基因的全部编码区、部分内含子区以及上、下游调控区各2000 bp，扩增片段长度为400～800 bp。将40头荷斯坦公牛的基因组DNA随机分为两组，利用NANO-DROP 2000型核酸分析仪（Thermo，美国）测定基因组DNA的浓度并将其稀释为50 ng/μL并等量混合（杜红丽等，2008）。PCR反应体系为25μL，其中10 pmol/μL上下游引物各1.25μL，2×Taq Master Mix 12.5μL，混池基因组DNA（50～100 ng/μL）2μL，ddH2O 8μL。PCR反应条件为：94℃5 min；94℃30 s，60℃30 s，72℃30 s，35个循环；最后72℃延伸7 min。PCR反应产物以2%琼脂糖凝胶电泳检测，将PCR扩增产物送北京擎科新业生物技术有限公司进行双向测序。基于测序结果，利用Chromas和DNAMan6.0软件比对鉴定多态位点及突变类型。针对FBP2基因鉴定到的11个SNPs，采用飞行时间质谱法进行个体基因型检测（王梦琦等，2018）。