《表2 用于PCR扩增的cp DNA引物序列》

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《青藏高原地区山生柳遗传多样性研究》

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选取改良的CTAB法从干燥处理的山生柳嫩叶中提取基因组DNA（Porebski et al.，1997）。参照序列选取已上传到NCBI上的Salix arbutifolia、S.babylonica、S.interior、S.oreinoma、S.purpurea、S.suchowensis和S.tetrasperma等柳属植物叶绿体基因组序列，引物片段的选取参考之前的研究（Hamilton，1999；Scarcelli et al.，2011；Shaw et al.，2005），用软件Primer Premier 5.0（Singh et al.，1998）、BioXM 2.6（黄骥和张红生，2004）和SnapGene 3.2.1（McKeone et al.，2014）进行引物设计，共设计了21对引物用于PCR扩增。扩增反应体系为25μL:2.5μL的10×PCR Buffer（含1.5mmol·L-1MgCl2）、0.5μL的10 mmol·L-1dNTP、正反引物各0.5μL（10 pmol·L-1）、1个单位的Taq DNA酶（TaKaRa，大连）、15～50 ng的模板DNA，去离子水补齐到25μL。PCR反应扩增程序:94℃预变性3 min；94℃变性45 s；60℃退火45 s；72℃延伸30 s；35个循环；72℃延伸5 min；4℃保存。PCR反应产物送至生物工程（上海）股份有限公司测序。将获得21对引物在12个居群24个个体中进行PCR扩增预试验，筛选出获得两对遗传多态性较高的引物[5'trnG2G-3'trnG（UUC）和5'rpS12-rpL20]用于所有个体的扩增测序（表2）。