《表3 用于PCR扩增的r DNA引物序列及反应条件》

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《基于核基因的黄绿卷毛菇系统发育与谱系地理学分析》

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硅胶干燥的子实体经烘箱45℃烘干后采用改进的CTAB法提取总DNA（Doyle，1987），用分光光度计NanoDrop 2000（Thermo Scientific）逐一测量每个样品的DNA质量与浓度，依据浓度将所有样品均稀释到10 ng/uL左右，利用ITS、IGS、LSU 3个片段引物对黄绿卷毛菇样品进行扩增，涉及到的引物和PCR反应条件已说明（表3）。扩增产物1%琼脂糖凝胶电泳检测。PCR程序为95℃变性5 min、不同引物的不同退火温度30 s、72℃延伸30 s（LSU 60 s），进行35个循环，最后72℃延伸10 min。PCR反应使用15μL体系，包括30 ng全基因组DNA、200 mmol/L 10×PCR Buffer、1.5 mmol/L Mg Cl2、0.2 mmol/Ld NTPs、200 nmol/L各引物，以及1 U的Taq DNA酶。所有PCR扩增的产物用CASpure PCR Purification Kit试剂盒（上海中科开瑞生物芯片科技股份有限公司）按照说明书进行纯化。纯化产物用BigDye v3.1（Applied Biosystems）进行测序PCR，引物使用与PCR扩增是相同的。测序PCR的扩增产物按照操作说明进行纯化，然后利用ABI 3730 xl（Applied Biosystems，USA）进行测序分析。