《表1 水稻Os PPDK基因PCR扩增及其测序引物》

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《水稻OsPPDK基因的克隆及生物信息学分析》

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利用Vector NTI软件，根据小麦Ta NAM基因（GenBank:HM027575.2）序列设计引物，以水稻金23B的cDNA为模板进行RT-PCR扩增，并对扩增片段测序，用软件BioEdit比对TaNAM序列和测序结果，发现序列相似性为68.72%.测序结果通过NCBI进行Blast比对，发现扩增序列与日本晴预测PPDK基因（GenBank:XM015783838）相似性高达99%，且为PPDK基因的一部分.为获得PPDK基因的完整序列，根据日本晴预测PPDK基因设计引物，以金23B的cDNA为模板进行RT-PCR扩增，并将扩增序列命名为Os PPDK.以上PCR引物如表1所示，PCR反应体系及反应程序如下，50μL反应体系:2×1-5 Mix 25μL，Forward Primer 2μL，Reverse Primer 2μL，Template 1μL，dd H2O 20μL.反应程序:预变性98℃，2 min；变性98℃，10 s；退火58℃，15 s；延伸72℃，10/30 s；最终延伸72℃，5 min；循环数35.PCR产物在1%琼脂糖凝胶上电泳，使用天根生化科技有限公司琼脂糖胶回收试剂盒回收纯化PCR产物，连接Blunt-Zero载体（购买于全是金生物科技有限公司），热激转化DH5ɑ感受态细胞（购买于武汉擎科生物有限公司），菌落PCR鉴定正确后送武汉擎科生物有限公司测序.