《表2 用于HCoV-OC43 N基因扩增和测序的PCR引物》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《从化地区儿童人冠状病毒流行病学与临床特点的观察》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

对于HCoV-OC43的N基因测序和系统发育分析，通过Primer Premier 5.0软件设计了3对引物，以结合相对保守的N基因区域。用于设计引物的参考序列包括GenBank数据库中可用的来自不同地区和年份的15种代表性菌株。它们的GenBank登录号为:NC＿005147.1，AY585229.1，AY585228.1，KF530099.1，KF530098.1，KF530097.1，KF530096.1，KF530095.1，KF530093.1，KF530091.1，KP198611.1，KJ958218.1，JN129835.1，L14643.1和Z21849.1。引物是由中国上海的Invitrogen公司合成的。在准备的20μL反应混合物中进行PCR，该混合物包括10μL 2×Premix Ex Taq（Takara，大连，中国），2μL模板cDNA，正向和反向引物各0.5μmol。PCR程序为:95℃持续5 min，然后进行35个循环:95℃持续30 s，50℃至55℃（有关不同引物的解链温度，请参见表1）1 min和72℃1 min，最后在72℃延伸10 min。用琼脂糖凝胶DNA纯化试剂盒（中国大连，Takara）纯化用于测序的PCR产物，并将其克隆到PMD19-T载体（中国大连，Takara）中。用于克隆和测序的所有PCR产物均来自三个独立的PCR反应。测序由中国上海的Invitrogen公司进行。用于测序的引物见表2。