《表2 Sanger测序验证ABCB11基因突变位点所在DNA序列的扩增和测序引物》

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《1例进行性家族性肝内胆汁淤积症2型婴儿的临床和遗传学分析》

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提取患儿及其父母的外周血DNA，根据二代测序的检测结果，采用Sanger测序验证ABCB11突变基因。根据ABCB11基因的DNA序列，使用Primer Premier 5.0软件设计聚合酶链反应引物（如表2，北京迈基诺基因科技股份有限公司合成）。聚合酶链反应体系:2×Goldstar Buffer Mix10μL，上、下游引物各1μL，DNA 1μL，灭菌双蒸水7μL，共20μL。反应条件参照文献[13]:95℃预变性10 min；随后分为4步，即第1步94℃变性30 s，62℃退火30 s，72℃延伸45 s，共3个循环；第2步94℃变性30 s，60℃退火30 s，72℃延伸45 s，共5个循环；第3步94℃变性30 s，58℃退火30 s，72℃延伸45 s，共10个循环；第4步94℃变性30 s，56℃退火30 s，72℃延伸45 s，共17个循环；最后再72℃延伸5 min。