《表2 连接反应体系：联合应用PCR扩增和Sanger测序对脊髓小脑型共济失调进行基因诊断的临床意义》

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《联合应用PCR扩增和Sanger测序对脊髓小脑型共济失调进行基因诊断的临床意义》

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使用Minibest凝胶DNA抽提试剂盒（日本Takara公司）纯化PCR扩增的DNA片段，再用Mighty TA克隆试剂盒（日本Takara公司）对纯化的PCR产物进行克隆。先将纯化的DNA扩增产物与pMD20-T载体（日本Takara公司）按表2中的体系进行连接，连接反应于16℃条件下进行30 min。然后将连接物转化入DH5α大肠杆菌[生工生物工程（上海）股份有限公司]，通过自配的含100 ng/mL氨苄西林的Luria-Bertani琼脂平板[生工生物工程（上海）股份有限公司]筛选阳性克隆菌株，抽提质粒，用M47引物[生工生物工程（上海）股份有限公司]对质粒进行测序。每一个体挑取10个克隆进行质粒测序，出现2次以上相同CAG重复序列的重复数被认定为该个体的序列重复数。