《表1 扩增SCA致病基因所用的引物及正常基因扩增片段长度》
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《联合应用PCR扩增和Sanger测序对脊髓小脑型共济失调进行基因诊断的临床意义》
提取SCA家系中5例个体(Ⅲ-1、Ⅲ-4、Ⅲ-5、Ⅳ-1、Ⅳ-2)外周血DNA,其中Ⅲ-1、Ⅲ-4及Ⅳ-2已被诊断为S C A,诊断依据包括临床症状、影像学检查结果及家族史。使用Primer 3软件设计9对引物,由生工生物工程(上海)股份有限公司合成,分别扩增SCA1、SCA2、SCA3、SCA6、SCA7、S C A 8、S C A 1 2、S C A 1 7及D R P L A基因,引物序列见表1。PCR扩增体系为50μL,其中10×PCR缓冲液5μL、25 mmol/L Mg2+8μL、25 mmol/L dNTP 1μL、5 U/mL高保真Taq DNA聚合酶0.4μL、10μmol/L引物2μL、100 ng/μL DNA模板2μL、H2O 31.6μL,PCR扩增试剂为生工生物(上海)股份有限公司产品。扩增程序为95℃预变性5 min;然后进入35个扩增循环,每个循环包括94℃变性1 min,60℃退火45 s(扩增SCA7的退火温度为57℃),72℃延伸45 s;循环完成后于72℃延伸5 min。PCR扩增在Applied Biosystems 9700 PCR扩增仪(美国ABI公司)上进行。扩增产物于1.5%琼脂糖凝胶上电泳检测(80 V电泳1.5 h),凝胶成像仪下观察结果。
图表编号 | XD0074180500 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2019.06.30 |
作者 | 陈韭铭、顾鸣敏、孙顺昌 |
绘制单位 | 上海交通大学医学院附属瑞金医院北院检验科、上海交通大学医学院医学遗传学教研室、上海交通大学医学院附属瑞金医院北院检验科 |
更多格式 | 高清、无水印(增值服务) |