《表1 VP8*基因片段扩增所用引物》

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《轮状病毒Rotateq及Rotarix疫苗VP8~*蛋白的原核表达、纯化与鉴定》

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从Genbank库查阅获得Rota Teq疫苗株（RVA/Vaccine/USA/Rota Teq-WI79-4/1992/G6P1A[8]）（Gen Bank:GU565044） 及Rotarix疫苗株（RVA/Vaccine/USA/Rotarix-A41CB052A/1988/G1P1A[8]）（Gen Bank:JN849113） 的VP8*基因序列，委托金维智生物科技（北京）有限公司合成，并根据大肠杆菌表达系统对氨基酸密码子的亲和性，在不改变氨基酸序列的前提下对核酸序列进行适当的优化，从而有利于后续蛋白大量表达。设计一对引物，同时在引物的上下游分别引入Bam H I和Xho I限制性内切酶酶切位点（如表1所示）。分别以上述合成序列为模板，通过PCR扩增得到目的片段，PCR反应参数:94℃预变性5 min；94℃30 s，55℃30 s，72℃1 min，35个循环；72℃终延伸10 min。PCR产物参照凝胶试剂盒使用说明书进行回收。