《表1 扩增REV全基因组片段和突变所用引物及反应条件》

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《禽网状内皮组织增生症病毒MD-2株感染性克隆的构建与突变分析》

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注：表中REV1T F和REV2 F引物中加粗斜体部分为引入的SbfⅠ酶切位点序列；REV2 R和REV3T R引物中加粗斜体部分为引入的EcoRⅠ酶切位点序列。

根据GenBank收录的REV MD-2全长基因组序列（JX912710），将基因组分为三个片段（F1、F2、F3），对REV MD-2前病毒基因组中的酶切位点进行分析，并在两端引入SbfⅠ和EcoRⅠ这两个酶切位点，为目的片段连入载体时形成黏性末端。Spe(2650）和AflⅡ（5678）两个酶切位点用于连接中间片断。将2653处的TSP451酶切位点，利用PCR方法将2655位处的G同义突变为A，去掉该酶切位点作为拯救病毒的遗传标记。序列设计参照文献[10]，见表1，由华大基因合成。3个PCR目的片段在前病毒全基因组中的位置及各片段的酶切位点见图1。