《表1 pol基因区扩增引物及反应条件》

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《德宏傣族景颇族自治州报告的HIV-1新感染者中耐药情况及其影响因素》

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2）耐药检测：（1） HIV核糖核酸（RNA）提取：使用德国罗氏诊断有限公司生产的核酸纯化试剂盒（Mag NA Pure LC Total Nucleic Acid Isolation Kit）及全自动核酸提取仪（Mag NA Pure 2.0 Instrument）提取HIV RNA，具体操作严格按照说明书进行。（2） pol基因区扩增：应用巢式反转录荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）扩增得到HIV-1 pol基因片段，扩增引物及反应条件见表1。（3） PCR扩增产物测序：使用质量分数1%琼脂糖凝胶电泳观察PCR产物条带，在目标位置有条带的样本PCR产物送北京诺赛基因组研究中心有限公司进行基因测序。（4） HIV耐药基因亚型和耐药分析：用Lasergene中的Seq Man7.1.0(44.1）程序编辑和拼接基因序列，并将拼接后的序列导出FASTA格式保存。用美国洛斯阿拉莫斯（Los Alamos）国家实验室的HIV序列数据库（https://www.hiv.lanl.gov/）中在线软件HIV-Blast，将最终序列与数据库中的参考序列进行比对，初步获得HIV亚型；下载国际HIV参考株序列；用Mega 7.0软件Neighbor-joining构建系统进化树，确定亚型；将最终的序列提交到斯坦福大学的HIV耐药数据库（http://hivdb.stanford.edu/），耐药标准为2014年WHO耐药监测指南推荐的12种监测药物中有≥1种耐药评分≥15[6]，即判定为耐药。