《表1 恶性疟原虫Pfcrt、PPffmmddrr 1、Pfdhfr、Pfdhps、KK13基因套式PCR扩增引物序列和反应条件》

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《2015—2016年山东省由赤道几内亚输入的恶性疟原虫抗药性基因多态性分析》

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采用套式PCR方法扩增目的基因片段。每份标本取200μL抗凝血，按照QIAamp DNA Blood Mini Kit操作说明书提取基因组DNA，置于-20℃保存。根据参考文献[5，7-8]设计扩增恶性疟原虫Pfcrt、Pfmdr1、Pfdhfr、Pfdhps、K13基因目的片段引物，具体多态性位点、引物序列、PCR反应条件如表1所示。PCR反应体系为：DNA模板2μL，2×Taq PCR预混液10μL，10μmol/L正、反向外侧引物各1μL，用dd H2O补足至20μL（第1轮）；第1轮产物模板2μL，2×Taq PCR预混液25μL，10μmol/L正、反向内侧引物各2μL，用dd H2O补足至50μL（第2轮）。反应完毕后，取5μL第2轮反应产物进行1.5%琼脂糖凝胶电泳，在凝胶成像仪中观察结果并拍照。