《表1 PCR扩增基因引物序列》

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《MiR-133a-3p在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌病理特征的关系》

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MiR-133a-3p的引物序列通过Primer5软件设计，委托上海生工生物工程有限公司合成，以β-actin为内参，引物序列见表1。每例乳腺组织称取100mg，按照Takara公司的RNA提取试剂盒RNAiso Plus说明书和PrimeScriptTM RT Master Mix说明书进行RNA提取和反转录。以反转录的c DNA为模板，应用qPCR技术检测组织中MiR-133a-3p的表达水平，qPCR仪为美国GE公司的Rotor-Gene3000，扩增体系按照Takara公司的SYBR R Premix EX TaqTM试剂盒说明书进行配制，扩增条件为:95℃预变性30s；PCR反应40个循环（每个循环反应95℃5s、60℃30s），每个样本三次重复。将β-actin的cDNA进行10倍倍比稀释10个浓度梯度，参照乙型肝炎病毒检测试剂盒（深圳匹其公司，批号20170901）的质控标准曲线得出扩增基因的标准曲线，根据标准曲线得出基因的表达浓度。