《表1 PCR扩增PLMP基因所需的引物序列》

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《蜜蜂幼虫芽胞杆菌金属蛋白酶基因的原核表达及多克隆抗体的制备》

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根据GenBank公布的幼虫芽胞杆菌核苷酸序列（CP003355.1），利用Primer premier 5.0设计1对特异性引物（见表1），引物的5′端分别加BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点识别序列。将幼虫芽胞杆菌阳性菌液DNA作为模板，进行PCR扩增。PCR反应体系:10×PCR buffer 3μL，MgCl22.5μL，dNTPs 2.5μL，Taq酶（5U）0.25μL，上、下游引物各1μL，模板2μL，加ddH2O补足至25μL。反应条件为:95℃10min；93℃1min，55℃30s，72℃延伸1 min，共30个循环；72℃延伸5min。反应产物经10g/L的琼脂糖凝胶电泳检测后用DNA胶回收试剂盒回收目的片段。