《表1 PCR扩增所需引物序列》

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《小麦赤霉病菌FgVPS26与FgRab7的相互作用及对DON毒素合成的影响》

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注:黑色加粗部分为酶切位点和保护碱基。

以禾谷镰刀菌菌株PH-1 cDNA为模板，以HRab7F和HRab7R为引物扩增FgRab7原始态CDS片段（FgRab7）；利用FgRab7 ORF内两对引物Rab7P1F/R和Rab7P2F/R扩增两段重叠片段，再通过overlap将两个片段连接形成带有突变位点的FgRab7激活态CDS片段（FgRab7-CA）；利用HVPS26F和HVPS26R为引物扩增FgVPS26基因编码序列片段（FgVPS26）。将FgRab7片段和FgRab7-CA片段分别进行NdeI+BamHI双酶切，然后连接到经过相同酶切的载体pGBKT7上，克隆测序，序列正确后，转化酵母菌AH109感受态细胞，通过质粒酶切验证获得原始型p GBKT7-FgRab7和激活型pGBKT7-FgRab7-CA重组载体。同样的方法将FgVPS26连接到p GADT7载体上，获得p GADT7-FgVPS26重组载体。引物序列见表1。