《表1 PCR扩增引物序列》

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《苏云金芽胞杆菌Vip3AaAdAa嵌合蛋白的构建及其杀虫活性分析》

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Vip3AaAdAa基因是由vip3Aa39提供前段、后段序列，vip3Ad提供部分中间序列，拼接得到的嵌合基因。通过比对Vip3Aa39与Vip3Ad氨基酸序列，选取部分保守区域，设计了5对中间引物（JB2F、JB2R、JB3F、JB3R、JB4F、JB4R、JB5F、JB5R、JB6F和JB6R）及2对全长引物（39F、39R和DF、DR），在全长引物中分别加入了Bam H I和Sal I酶切位点（下划线），见表1。参考重叠延伸PCR法进行片段的互换[19]，用KOD高保真酶进行扩增，回收PCR产物，将重组基因与pET21b质粒分别双酶切后4℃连接过夜，将重组质粒转入BL21感受态，挑取阳性克隆子送生工生物工程（上海）股份有限公司测序，使用NCBI数据库和DNAMAN软件对结果进行分析比对。