《表1 PCR扩增引物序列》

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《多种动物源A型产气荚膜梭菌的分离鉴定及生物学特性》

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*Cpa、cpb、etx、iap、cpb2分别表示Cp的α、β、ε、ι、β2各毒素的毒素基因

参照文献[19-20]，采用多重PCR的方法对分离到的Cp菌进行毒素分型，多重PCR体系为25μL反应体系：10×PCR buffer 2.5μL，1.25μmol/L dNTP 1μL，混合引物2μL（α、β、ε、ι4对毒素基因特异性引物各0.5μL，引物序列见表1），蒸馏水16.75μL，DNA模板2.5μL，Taq DNA聚合酶0.25μL；反应条件：95℃预变性5 min，94℃变性1 min，55℃退火1 min，72℃延伸2 min，进行38个循环，最后72℃延伸10 min。取PCR扩增产物10μL，于15 g/L琼脂糖凝胶中电泳。取PCR扩增产物10μL，于琼脂糖凝胶中电泳并参照DL2000 DNA Marker观察并分析结果。然后采用β2毒素基因引物（表1）对分离到的6株CpA进行β2毒素基因检测，PCR产物经15 g/L琼脂糖凝胶电泳分析结果。