《表2 扩增恶性疟原虫Pfcrt、Pfmdr和Pf K13基因的引物序列》

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《中缅边境地区恶性疟原虫Pfcrt、Pfmdr和PfK13基因多态性与体外药物敏感性相关性的分析》

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参照文献[26]和试剂盒说明书提取各疟疾患者血样DNA。参考文献[16，27]设计引物（表2），引物由上海英潍捷基贸易有限公司合成。Pfcrt、Pfmdr基因巢式PCR的反应体系和扩增条件如下。第1轮体系为：模板DNA 2.0μl，10×PCR缓冲液2.5μl，d NTPs（2.5 mmol/L）1.6μl，上、下游引物（10μmol/L）各0.6μl，Taq聚合酶0.2μl，加去离子水至20μl；第2轮的模板为第1轮PCR产物1.0μl，其余同第1轮。Pfcrt、Pfmdr基因第1轮扩增条件为：95℃5 min；92℃30 s，45℃30 s，65℃45 s，45个循环；72℃15 min。第2轮为：95℃5 min；92℃30 s，45℃30 s，65℃30 s，45个循环；72℃15 min。Pf K13基因第1轮体系为：模板DNA 2.0μl，10×PCR缓冲液4μl，dNTPs（2.5 mmol/L） 1.6μl，上、下游引物（10μmol/L）各0.5μl，Taq聚合酶0.4μl，加去离子水至20μl；第2轮的模板为第1轮的PCR产物，10×PCR缓冲液体积改为3.4μl。PfK13基因第1轮扩增条件为：95℃15 min；95℃30 s，58℃2 min，72℃2 min，30个循环；72℃10 min。第2轮为：95℃15 min；95℃30 s，60℃1 min，72℃1 min，30循环；72℃10 min。第2轮PCR产物电泳阳性样品送北京六合华大基因科技股份有限公司进行正反向测序。