《表1 引物和探针序列：重组聚合酶扩增技术(RPA)定量检测淋巴细胞中的HIV-1pol基因》

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《重组聚合酶扩增技术(RPA)定量检测淋巴细胞中的HIV-1pol基因》

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TwistAmpTM exo kit 50μl反应体系同时检测HIV-1 DNA和IPC DNA，含缓冲液29.5μl，上游引物2.1μl（10μM），下游引物2.1μl（10μM），HIV-1 FAM标记探针0.6μl（10μM），IPC ROX标记探针0.6μl（10μM），2.5μl镁离子（280 m M），2.6μl IPC DNA（108/μl）和10μl不同浓度拷贝HIV-1DNApol基因（101/μl，102/μl，103/μl，104/μl，105/μl，106/μl，107/μl），一管冻干酶制剂。将除镁离子外的成分充分混匀后瞬时离心。将不含镁离子的RPA反应试剂避光放置于4℃冰盒，10μl不同浓度拷贝的HIV-1 pol基因模板和2.6μl IPC加入反应管中，在RPA反应试剂放置于Axxin T8-ISO恒温扩增仪扩增前加入镁离子，瞬时离心。39℃反应30 min，实时收集FAM和ROX荧光值，每10秒收集一次荧光值。参照文献[7-8]合成引物，引物中一段和内参基因互补，一段和HIV-1互补，隐孢子虫基因为内参基因（见表1）。