《表1 引物与探针：转基因大豆MON89788实时荧光重组酶聚合酶扩增检测方法的建立》

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《转基因大豆MON89788实时荧光重组酶聚合酶扩增检测方法的建立》

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FAM:6-羧基荧光素；BHQ:荧光淬灭基团；THF:四氢呋喃；C3-Spacer:C3间隔

根据转基因大豆MON89788左边界侧翼序列信息，利用Primer Premier 5.0软件分析侧翼序列的GC含量，分别在插入位点的两侧即分别在大豆基因组和外源插入片段的不同区域各设计5条引物，引物长度为30～35 bp。探针序列包含大豆基因组及外源插入序列，用FAM-dT（FAM:6-羧基荧光素，6-carboxy-fluorescein）代替探针第34个碱基T，用BHQ1-dT（BHQ:荧光淬灭基团，Black hole quencher）代替第37个碱基T，用四氢呋喃（tetrahydrofuran，THF）碱基类似物代替第35个碱基G。当探针与其互补序列配对时，核酸外切酶会专一的切割THF位点，从而导致荧光基团与淬灭基团的分离，进而产生荧光信号。引物和探针在侧翼序列上的位置见图1A，探针设计原理见图1B。荧光定量PCR引物与探针参考前期研究报道（黄新等，2016），各引物和探针配置为10μmol/L。引物与探针的具体信息见表1。引物和探针均由生工生物工程（上海）有限公司合成。