《表3 引物与探针序列：药用贝母属系统发育关系分析及多重实时荧光PCR检测方法的建立》

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《药用贝母属系统发育关系分析及多重实时荧光PCR检测方法的建立》

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通过对贝母属序列分析比较，选择最优DNA条形码作为靶基因，设计贝母通用引物及通用探针、川贝母特异探针及平贝母、新疆贝母、伊犁贝母、轮叶贝母等伪品贝母的特异探针（表3）。使用随机序列DNA生成工具DNAux 3.0产生一段DNA序列，在NCBI中BLAST无与之同源的DNA片段，在这段随机DNA序列上下游分别连接上贝母属的通用引物序列（上游为原序列，下游为反向互补序列），从而形成106 bp的阳性扩增内标DNA序列，将这段扩增内标序列委托人工基因合成，合成片段连接到PMD18-T载体上，转化感受态DH5-a，质粒提取，利用ABI3730XL测序仪对重组质粒进行测序验证，结果与目的片段一致。采用4种不同发光基团如FAM、JOE、ROX、CY5对各个探针的5?端进行荧光素修饰，3?端的淬灭基团用Dabcyl或BHQ1或BHQ2修饰。