《表5 PCR反应体系：药用贝母属系统发育关系分析及多重实时荧光PCR检测方法的建立》

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《药用贝母属系统发育关系分析及多重实时荧光PCR检测方法的建立》

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提取的基因组DNA经紫外分光光度计测定其纯度和浓度，测定A260/A280值均在1.8～2.0，质量浓度在10 ng/μL以上，说明DNA纯度较高，浓度适中，符合PCR扩增要求。通过对引物浓度和探针浓度优化，确定最佳引物混合物终浓度为5.0μmol/L，总反应体系为20μL，包括2×TaqManMaster Mix 10.0μL，引物（正向和反向，10.0μmol/L）1.0μL，探针混合物（5.0μmol/L）1.0～2.0μL，DNA Template（1～20ng/μL）2.0μL，ddH2O 6.0μL（表5）。PCR最佳反应条件:95℃、2 min；95℃、10 s；58℃、35 s；40个循环，在此收集信号。待测样本检测结果判定:在同时进行的空白、阳性对照实验结果正常的情况下，被检测样品应有相应荧光信号检出，且相应荧光通道出现明显的扩增曲线，Ct值≤35，说明DNA提取是有效的。