《表2 引物和探针的序列：甘薯茎腐病菌Taq Man荧光定量PCR检测方法的建立与应用》

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《甘薯茎腐病菌Taq Man荧光定量PCR检测方法的建立与应用》

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FAM:羧基荧光素标记；MGB:小沟结合修饰FAM:6-Carboxyfluorescein；MGB:Modified with minor groove binder

利用引物（Ddad3/Ddad4）（表2） 对D.dadanti DNA进行常规PCR扩增，得到的目的片段与pMD19-T vector连接，然后转入大肠杆菌（Escherichia coli）DH5α感受态细胞，接种到含有氨苄西林（ampicillin，Amp）抗性的LB固体培养基上，置于37℃的恒温培养箱中培养12 h，挑选长出的阳性菌落，接种到含有100 mg/L Amp的LB液体培养基中，37℃摇菌过夜，用Simgen快速质粒DNA小量试剂盒提取质粒，利用Ddad3/Ddad4引物进行PCR扩增，电泳鉴定后送杭州擎科生物有限公司进行测序验证。质粒鉴定正确后，用分光光度计测定质粒浓度，并计算质粒拷贝数。